細(xì)胞學(xué)堂 | RAW 264.7誘導(dǎo)極化及鑒定大全

細(xì)菌和脂多糖（LPS）可以誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向M1型分化，產(chǎn)生促炎細(xì)胞因子，抵抗病原入侵，但也會(huì)造成機(jī)體損傷，在實(shí)驗(yàn)中可采用2.5ng/mL IFN-γ和200ng/mL LPS共同作用12小時(shí)誘導(dǎo)其極化；

白細(xì)胞介素（IL-4）可以誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向M2型分化，分泌抗炎細(xì)胞因子，并在組織修復(fù)與重建和腫瘤的形成過程中發(fā)揮作用，在實(shí)驗(yàn)中可采用10ng/mL IL-4作用12小時(shí)誘導(dǎo)其極化。

WB可以分析RAW264.7細(xì)胞iNOS、YM-1和Arg-1的表達(dá)水平（如圖3）；

圖3. WB分析照射對(duì)IL-4誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞YM-1和Arg-1的表達(dá)影響

流式細(xì)胞術(shù)（FCM）可以分析RAW264.7細(xì)胞表面CD86和CD206的表達(dá)（如圖4）；

圖4. 流式細(xì)胞術(shù)分析照射對(duì)IL-4誘導(dǎo)的小鼠RAW264.7細(xì)胞CD206和CD209的表達(dá)

實(shí)時(shí)定量 PCR 和 ELISA 可以分析IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-12 及 IL-10 等細(xì)胞因子的表達(dá)及分泌(如圖5）；

圖5. 用于實(shí)時(shí)熒光定量PCR的引物序列

Griess reagent 可以分析細(xì)胞培養(yǎng)上清 NO 生成（如圖6）。

圖6. 不同樣品對(duì)RAW 264.7中NO產(chǎn)生的影響

參考文獻(xiàn)

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