細胞學堂 | 懸浮細胞培養異常解決方法

更新時間：2023-03-17 | 點擊率：2288

懸浮細胞大多胞體呈圓形，不貼于支持物上，呈懸浮生長，容易大量繁殖。懸浮細胞培養雖比貼壁細胞少了消化的步驟，但培養起來同樣不易。有碎片、形態改變、生長速度慢、細胞貼壁……每一種異常都牽動著我們的心。

因此本期細胞學堂整理了懸浮細胞收貨和培養過程中的常見問題，并針對各個問題列出解決辦法，帶你逐個擊破！

運輸常見問題及處理方法

碎片多

處理方法：懸浮細胞受到運輸或者其他因素導致細胞損傷時，容易產生細胞碎片，碎片可通過低速離心（800~1000rpm，3min）去除；低速離心同時也會丟失細胞，故細胞密度低的時候不適用，細胞密度低時應正常轉速離心，保留細胞優先。

細胞不圓/形態變了/聚團

處理方法：懸浮細胞受到運輸或者微環境變化影響時，可能出現變形，聚團等現象，在使用正確培養基和操作都正確的情況下，一般繼續培養一周左右可以恢復原狀。

培養過程常見問題及處理方法

細胞不圓/形態變了/聚團

處理方法如下：

少量細胞聚團、呈葡萄串狀，屬于正?，F象，特別是細胞密度較低時，易出現這種情況。通過靜養（少操作，少觀察）、補加血清（5%）等方式，讓細胞密度增高逐漸適應環境后可以恢復正常；

血清品牌會影響細胞生長狀態，如果一種不會聚團的細胞，養出來全部聚團，分散的細胞很少，這時候要考慮血清的影響。

細胞生長慢或不生長

處理方法：懸浮細胞有密度依賴性，在高密度下狀態比較好，低密度時狀態較差，所以傳代比例要控制，細胞狀態不好時，傳代可以不用離心法，而是補液或者半換液的方式，以避免離心損失細胞。

細胞發生貼壁

處理方法如下：

細胞培養瓶靜置時間太長，細胞沉底后會出現少量貼壁現象，但這種貼壁非常松，吹一下或拍一下細胞就可以起來；此現象為正常現象，無需特殊處理。

如果細胞貼的非常緊，形態已經變成類似于上皮樣時，需考慮是否為細胞特性或者有其他因素刺激導致；

日常操作避免染菌以及使用優質血清是預防懸浮細胞貼壁的有效方法。

培養小貼士

懸浮細胞常規推薦接種密度：3-5×10⁵cell/mL，生長到2×10⁶cell/mL左右可繼續傳代；該密度建議為理論值，實際按照每個細胞特性有波動；

培養懸浮細胞需要穩定的生長環境，少操作，少觀察，更有利于細胞生長；

不建議將聚團的細胞頻繁吹散，等待密度高和狀態改善時，細胞會自行散開；部分細胞聚團生長為特性，吹散不利于生長，請注意查看相關培養說明；

有些細胞本身就是聚團生長(NK92,NK92MI,JURKAT,H209,ATT20等)，有些細胞本身就形態不圓（H9等），為正?，F象，無需特殊處理；

豎瓶培養可以促進細胞生長，但由于拿出來觀察時都是橫瓶，觀察久了細胞會貼到底部，觀察完再次豎起來就會有細胞掛在瓶底部，而細胞沒有培養基滋潤很快就會死掉并殘留在壁上，從而導致養著養著細胞越來越少，貼壁細胞越來越多；因此，在培養瓶豎置操作時需注意吹下培養瓶底部的細胞，避免細胞殘留。