常見的細(xì)胞輔助試劑及其應(yīng)用

　　細(xì)胞輔助試劑在細(xì)胞培養(yǎng)、流式細(xì)胞術(shù)等實(shí)驗(yàn)中發(fā)揮著關(guān)鍵作用，它們能夠優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件、提高實(shí)驗(yàn)效率并確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。以下是一些常見的細(xì)胞輔助試劑及其應(yīng)用：
 

　　一、細(xì)胞培養(yǎng)輔助試劑
 

　　L-谷氨酰胺
 

　　作用：細(xì)胞培養(yǎng)中細(xì)胞進(jìn)行能量生成以及蛋白質(zhì)和核酸合成所必需的一種營(yíng)養(yǎng)素。
 

　　特性：不穩(wěn)定，在中性溶液中會(huì)自發(fā)降解，降解率隨保存溫度而變。降解后生成的副產(chǎn)物氨對(duì)干細(xì)胞、原代細(xì)胞等具有毒性。
 

　　替代品：L-丙氨酰-L-谷氨酰胺，其在水溶液中穩(wěn)定性高，可保持長(zhǎng)時(shí)間穩(wěn)定的營(yíng)養(yǎng)供給，并降低分解產(chǎn)物造成的細(xì)胞毒性。
 

　　胰島素
 

　　作用：對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞具有多效合成作用，促進(jìn)葡萄糖和氨基酸攝取、脂肪生成、單價(jià)陽離子和磷酸轉(zhuǎn)運(yùn)、蛋白質(zhì)和核酸合成。
 

　　應(yīng)用：MCF-7和NIH:OVCAR-3等細(xì)胞需要額外添加胰島素以維持細(xì)胞狀態(tài)。
 

　　β-巰基乙醇
 

　　作用：維持細(xì)胞內(nèi)的還原環(huán)境，保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷。
 

　　應(yīng)用：Thp-1和MC3T3-E1 subclone 14等細(xì)胞需要添加β-巰基乙醇以維持細(xì)胞狀態(tài)。
 

　　平衡鹽溶液
 

　　組成：主要由無機(jī)鹽、葡萄糖組成。
 

　　作用：維持細(xì)胞滲透壓平衡，保持pH穩(wěn)定及提供簡(jiǎn)單的營(yíng)養(yǎng)。同時(shí)用于取材時(shí)組織塊的漂洗、細(xì)胞的漂洗、配制其他試劑等。
 

　　其他添加劑
 

　　非必需氨基酸(NEAA)：含幾種非必需氨基酸的合劑，添加到原培養(yǎng)基中可提供更全面的營(yíng)養(yǎng)支持。
 

　　HEPES：一種很強(qiáng)的緩沖劑，能使細(xì)胞培養(yǎng)基在pH7.2-7.6條件下緩沖能力增強(qiáng)，防止培養(yǎng)基pH迅速變動(dòng)。
 

　　二、流式細(xì)胞術(shù)輔助試劑
 

　　紅細(xì)胞裂解液
 

　　作用：利用低滲原理破碎血液或骨髓標(biāo)本中的紅細(xì)胞，消除紅細(xì)胞產(chǎn)生的干擾，從而實(shí)現(xiàn)對(duì)白細(xì)胞的表面抗原的準(zhǔn)確分析。
 

　　特性：溫和的低滲條件下裂解紅細(xì)胞，操作簡(jiǎn)單，紅細(xì)胞裂解，性能穩(wěn)定，產(chǎn)生細(xì)胞碎片少。
 

　　固定破膜劑
 

　　作用：對(duì)細(xì)胞懸液進(jìn)行固定和破膜，使抗體順利進(jìn)入胞內(nèi)，并使細(xì)胞形態(tài)仍然保存完整。可以減少實(shí)驗(yàn)中非特異性染色，在加入破膜劑時(shí)也可以加入熒光標(biāo)記抗體進(jìn)行染色。
 

　　特性：破膜后細(xì)胞分群保持完整，溶血、破膜、染色一步完成，操作簡(jiǎn)便，保持抗體的特異性、靈敏度以及可重復(fù)性。
 

　　刺激阻斷劑
 

　　作用：刺激細(xì)胞活化，提高細(xì)胞因子分泌量，便于檢測(cè)；同時(shí)阻斷細(xì)胞因子分泌到細(xì)胞外，使其聚集在細(xì)胞內(nèi)，提高檢出率。
 

　　常用試劑：刺激素為Phorbol 12-Myristate 13-Acetate(PMA，佛波酯)和Ionomycin(離子霉素)，阻斷劑為Brefeldin A(BFA，布雷非德菌素A)和Monensin(莫能霉素)。
 

　　流式染色緩沖液
 

　　作用：適用于懸浮細(xì)胞的免疫熒光染色實(shí)驗(yàn)，含BSA以疊氮鈉作為防腐劑。可用于抗體和細(xì)胞的稀釋，以及表面染色和流式分析的洗滌階段。
 

　　特性：有效降低非特異性結(jié)合，適用于各種流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)。
 

　　封閉試劑
 

　　作用：封閉細(xì)胞表面的Fc受體，減少抗體的非特異性結(jié)合，降低檢測(cè)背景，獲得更清晰的結(jié)果。
 

　　常用試劑：FcR阻斷劑(如CD16和CD32抗體)。