收到大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作

　　大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞取自新鮮的組織，按照標(biāo)準(zhǔn)操作流程分離培養(yǎng)，*培養(yǎng)基能提供細(xì)胞理想的生長(zhǎng)條件，降低雜細(xì)胞污染，保證不同批次間細(xì)胞質(zhì)量的穩(wěn)定，所提供的原代細(xì)胞均需經(jīng)過細(xì)胞類型特異性標(biāo)記物、細(xì)胞形態(tài)學(xué)等檢測(cè)，保證細(xì)胞純度在90%以上；同時(shí)也需經(jīng)過微生物檢測(cè)，保證不含有HIV、HBV、HCV、支原體、真菌及其他類型的細(xì)菌。

　　
 

　　海馬椎體神經(jīng)元是海馬區(qū)的主要成分，主要功能是參與近期記憶、情緒及內(nèi)臟功能調(diào)節(jié)、是老年性癡呆等疾病的主要病灶之一。海馬神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)是研究神經(jīng)細(xì)胞生物學(xué)特性和外源干擾因素作用(細(xì)胞因子)的有效細(xì)胞模型，其在神經(jīng)生物學(xué)，發(fā)育生物學(xué)體外實(shí)驗(yàn)研究中已被廣泛應(yīng)用。大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞采用胰酶消化制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×105個(gè)/瓶，細(xì)胞純度可達(dá)80%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

　　

　　收到大鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。

　　

　　1、取出細(xì)胞瓶，75%酒精消毒后拆下封口膜，放入37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中靜置6-8小時(shí)或者過夜，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。

　　

　　2、海馬神經(jīng)元細(xì)胞為終末分化的細(xì)胞，建議直接使用，不建議擴(kuò)大培養(yǎng)。

　　

　　3、待細(xì)胞狀態(tài)最佳時(shí)準(zhǔn)備轉(zhuǎn)孔培養(yǎng)，進(jìn)行實(shí)驗(yàn)：

　　

　　（1）吸出細(xì)胞瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次。

　　

　　（2）加入0.125%的胰蛋白酶消化液約1mL至培養(yǎng)瓶中，37℃消化1min左右；顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后吸棄消化液，再加入*培養(yǎng)液終止消化。

　　

　　（3）用吸管輕輕吹打混勻，按適當(dāng)?shù)谋壤M(jìn)行轉(zhuǎn)孔培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)，放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

　　

　　（4）待細(xì)胞*貼壁后，培養(yǎng)觀察，每隔2-3天更換新鮮的*培養(yǎng)基。